质粒转染-质粒 反向转染

今天给大家分享一下质粒转染的问题——质粒反向转染，希望对你有所帮助。以下是这个问题的总结。让我们来看看。

影响质粒转染效率的因素有哪些？

1.质粒大小和转染量:一般来说，转染效率随着插入片段长度的增加而降低；但转染效率在一定范围内与质粒转染量呈正相关。

2.DNA质量:高质量的DNA对转染效率非常重要。如果质粒不纯，会显著影响转染复合物的形成，进而影响转染效率。因此，可以选择纯度较高的试剂盒来提取和纯化DNA，从而获得较高质量的DNA，提高转染效率。

3.转染试剂的选择:转染试剂将外源核酸片段导入细胞，影响内源基因的表达水平。转染实验前，应根据实验要求和细胞特性选择合适的转染试剂。比如在绵羊成纤维细胞的转染过程中，FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞的转染效果更好。筛选可以遵循高效低毒的原则。

4.质粒与转染剂的比例:在一定范围内，转染效率与质粒与转染剂的比例呈正相关，但毒性也会增加。可以根据推荐的转染试剂比例来确定合适的转染比例。

5.细胞状态:维持细胞生长和健康是提高转染效率的重要条件。建议最好选择对数生长期的细胞，在此期间细胞生长旺盛，可能获得较高的转染效率。不要选择传代次数过多的细胞，基因型可能会发生变化。

6.细胞密度:细胞密度过高或过低都会影响转染效果。太高难以转染，太低容易造成细胞死亡。因此，需要选择合适的细胞融合密度进行转染。一般来说，细胞密度在60%-80%时转染比较理想，但具体密度可根据转染试剂的说明书进行操作。

7.血清:血清含有大量蛋白质，可能会降低转染效率。一般转染试剂会要求使用无血清培养基进行转染，转染后会更换完全培养基。然而，一些新的转染试剂血清的存在不再构成威胁，甚至有助于提高转染效率，如阳离子聚合物。

8.抗生素:抗生素，如青霉素和链霉素，一般作为培养基中的添加剂，以防止细胞污染。这些抗生素对真核细胞没有毒性，但有些转染试剂增加了细胞的通透性，使抗生素进入细胞，可能间接导致细胞死亡，从而降低转染效率。培养基中是否添加抗生素可以根据转染试剂的要求来选择。

质粒DNA细胞转染的注意事项

线性化或超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率远高于线性DNA，尤其是瞬时转染。然而，线性DNA转染的整合概率较高。质粒太大而不能被转染。毕竟相对致密小的异物更容易被细胞吞噬。

如果你的质粒恰好比较大，又没有经验，那么选择明确表示可以转移大质粒的转染试剂，成功的几率会更高。有些转染试剂还会提供一些促进DNA凝固的成分，使DNA更致密，在形成转染复合物时更容易转染。纯化质粒的质量也会影响转染效率，所以一定要选择高质量的质粒。